Purifica??o e caracteriza??o da VDAC de mitoc?ndrias corticais aviares: identifica??o de modifica??es pós-traducionais nas porinas neuronais murinas e aviares

摘要

A VDAC é uma porina presente na MME cuja fun??o é crucial no metabolismo energético, sobrevivência e morte celular. A caracteriza??o da VDAC torna-se importante para a compreens?o das inter-rela??es da mitoc?ndria com os diferentes componentes citosólicos, tais como a HK. A liga??o HK-VDAC favorece a utiliza??o do ATP intramitocondrial em células neuronais, a HK cerebral pode interagir de formas diferentes com a VDAC, o que resulta em diferentes sítios de liga??o (sítios A e B). Os variados papéis metabólicos das isoformas da VDAC podem ser explicados pela presen?a de altera??es pós-traducionais. No presente trabalho purificamos a VDAC1 mitocondrial neuronal proveniente de cérebro aviar. Paralelamente, comprovamos que a presen?a de múltiplas formas das VDACs 1 e 2 em cérebros murino e aviar, seja devida à presen?a de modifica??es pós-traducionais, nomeadamente a fosforila??o. A proteína isolada apresentou peso molecular de 30KDa. Quando submetida à eletroforese e posteriormente à colora??o para a identifica??o de fosfoproteínas, a mesma mostrou-se desfosforilada. O conhecimento da presen?a, ou ausência de fosforila??o das VDACs, reside na importancia de estabelecer-se as bases moleculares ligadas à existência de sítios A e B nas mitoc?ndrias neuronais.