Стабилизациялюциферазы светляков Luciola mingrelica методами генетической инженерии

摘要

Данкраткий обзор результатов по стабилизации люциферазы светляков Luciolamingrelica методами генетической инженерии. Методом сайт-специфическогомутагенеза Cys62,146,164Ser получены мутантные ферменты с повышеннойтермостабильностью и меньшей зависимостью от добавок дитиотреитола. Получендвойной мутант G216N, A217L, термостабильность и устойчивость к ДМСО которогобыли в несколько раз выше, чем WT-люциферазы. Случайный мутагенез участка гена,кодирующего остатки 1-225, и скрининг мутантов позволили получить болеетермостабильный, чем WT-люцифераза, мутант МТ8 и более устойчивые кдиметилсульфоксиду мутанты MT3, MT4. Методом направленной эволюции участкагена, кодирующего остатки 130-390, после 4 циклов мутагенеза получен мутант4TS, содержащий 8 замен, удельная активность которого по сравнению сWT-люциферазой возросла в 2 раза, значение Km по АТФуменьшилось в 8 раз, а стабильность при 42°C увеличилась в 65 раз. Обсужденмеханизмстабилизацииданногомутанта.