Determination of Natural and Synthetic Estrogens by Radioimmunoassay (Ⅰ): Comparison of Direct and Extraction Methods for Quantification of Estrone in Human Serum

摘要

Sensitive and specific methods are needed for the valid determination of estrogens in human serum, especially in samples from individuals who normally exhibit low analyte concentrations but may also show increased levels during estrogen substitution. In preparation for a study of the pharmacokinetics and metabolism of estradiol in postmenopausal women, in-house extraction radioimmunoassays based on the use of selected antisera as well as commercially available direct and extraction radioimmunoassay kits applying both ~3H-and ~(125)I-labeled tracers were used to measure estrone, the main metabolite of estradiol, in clearly defined samples. These samples included pooled sera from children, males and females, charcoal-treated, serially diluted and spiked sera. From the results of these measurements it must be concluded that none of the direct or extraction assays tested gave accurate or plausible results with all samples analyzed, stressing the need of further sample clean-up as a general prerequisite for the valid determination of estrone in human serum.%Die zuverlässige Bestimmung von Östrogenen im menschlichen Serum erfordert sensitive und spezifische Methoden insbesondere dann, wenn die Proben von Personen stammen, die normalerweise niedrige, unter Östrogensubstitution aber auch erhöhte Analytkonzen-trationen aufweisen können. Zur Vorbereitung auf eine Untersuchung zur Pharmakokinetik und zum Metabolismus von Östradiol bei Frauen in der Postmenopause wurden laboreigene Radioimmunoassays mit ~3H-markiertem Tracer und verschiedenen Antiseren sowie kommerzielle Radioimmunoassays mit ~3H- und ~(125)I-markierten Tracern direkt oder nach vorheriger Extraktion des Untersuchungsmaterials eingesetzt, um Östron, den quantitativ bedeutendsten Metaboliten des Östra-diols, in einer Reihe von definierten Proben zu bestim- men. Diese Proben umfaßten u. a. gepoolte Seren von Kindern, Männern und Frauen sowie Aktivkohlebehandelte, seriell verdünnte oder mit Östron oder Östradiol aufgestockte Seren. Die Resultate dieser Messungen zeigen, daß keines der getesteten direkten oder Extraktionsverfahren mit allen untersuchten Proben stets richtige oder plausible Konzentrationswerte ergab; sie verdeutlichen somit, daß eine weitergehende Aufreinigung der Probe Voraussetzung ist für die zuverlässige Bestimmung von Östron im Serum des Menschen.