A compensatory increase in trehalose synthesis in response to desiccation stress in Saccharomyces cerevisiae cells lacking the heat shock protein Hsp12p

摘要

The effect of HSP12 deletion on the response of yeast to desiccation was investigated. The Δhsp12 strain was found to be more desiccation tolerant than the wild-type strain. Furthermore, the increased intracellular trehalose levels in the Δhsp12 strain suggested that this strain compensated for the lack of Hsp12p synthesis by increasing trehalose synthesis, which facilitated increased desiccation tolerance. Results obtained from flow cytometry using the membrane exclusion dye propidium iodide suggested that Hsp12p helped maintain plasma membrane integrity during desiccation. Analysis of the oxidative loads experienced by the wild-type and Δhsp12 strains showed that during mid-exponential phase, the increased trehalose levels present in the Δhsp12 cells resulted in increased protection of these cells against reactive oxygen species compared with wild-type cells. During stationary phase, lower levels of reactive oxygen species reduction by reduced glutathione was enhanced in the wild-type strain, which displayed lower intracellular trehalose concentrations. Comparison of the tolerance of the wild-type and Δhsp12 strains with applied oxidative stress showed that the Δhsp12 strain was more tolerant to exogenously applied H2O2, which we attributed to the higher intracellular trehalose concentration. Flow cytometry demonstrated that Hsp12p played a role in maintaining plasma membrane integrity during applied oxidative stress.%L'effet de la délétion de HSP12 sur la réponse de la levure à la dessiccation a été étudié. La souche Δhsp12 s'est révélée plus résistante à la dessiccation que la souche sauvage. De plus, les niveaux plus élevés de tréhalose intracellulaire chez la souche Δhsp12 ont suggéré que cette souche compensait l'absence de synthèse de Hsp12p en augmentant la synthèse de tréhalose, ce qui facilitait l'augmentation de la tolérance à la dessiccation. Les résultats de la mesure d'exclusion membranaire de l'iodure de propidium par cytométrie en flux ont suggéré que la Hsp12p aidait à maintenir l'intégrité de la membrane plasmique lors de la dessiccation. Les analyses de la charge oxydative subie par la souche sauvage et la souche Δhsp12 ont démontré que durant la phase mi-exponentielle, les niveaux supérieurs de tréhalose présents dans la souche Δhsp12 résultaient en une meilleure protection de ces cellules contre les espèces réactives de l'oxygène (ROS, reactive oxygen species) comparativement aux cellules de type sauvage. Lors de la phase stationnaire, les niveaux plus faibles de réduction des ROS par la GSH étaient augmentés chez la souche de type sauvage, celle-ci contenant de plus faibles concentrations de tréhalose intracellulaire. La comparaison de la tolérance des souches de type sauvage et Δhsp12 au stress oxydatif a démontré que la souche Δhsp12 était plus tolérante au H2O2 exogène, ce que nous avons attribué à la concentration plus élevée de tréhalose intracellulaire. La cytométrie en flux a démontré que la Hsp12p a joué un rôle dans le maintien de l'intégrité de la membrane plasmique durant le stress oxydatif.