キラル高速液体クロマトグラフィー/質量分析法による1-O-アルキルグリセロール光学異性体の分離とアルキル基の同定

摘要

キラル高速液体クロマトグラフィー/エレクトロスプレーイオン化質量分析法（HPLC/ESI-MS）を用いて， 深海生物の脂質を構成する1-O-アルキルグリセロールの立体配置（分子中のエーテル結合の位置）とアルキル基を同時に決定する方法を開発した．1-O-アルキルグリセロールの光学異性体（1-O-アルキル-sn-グリ セロールと3-O-アルキル-sn－グリセロール）と位置異性体（2-O-アルキル-sn-グリセロール）の標準品をビ スー3,5－ジニトロフユニルウレタン（DNPU）誘導体に変換して立体配置の異なる2種類のカラム（スミキラOA-4600及びOA-4600R）を用いて分析した．移動相にヘキサン-ジクロロメタン-エタノールを用いるこ とによって，これら異性体は互いに完全に分離された．光学異性体の溶出順番は両カラムで逆転した．分離 された異性体の同定にはHPLC/ESI-MSを使用した．HPLCカラムからの溶出成分のイオン化を促進するために2-プロパノールをポストカラム法でMSに導入し，負イオンモードでスペクトルを測定した．その結果， 誘導体のウレタン結合が開裂した強い［M-DNPU］~-のフラグメントイオンが検出され，アルキル基の同定 が可能であることが認められた．本法を深海魚の一種，ホシゴマシズ（Stromateus Stellatus）由来のアルキル グリセロールに適用し，グリセロール部のキラリティー（S配置，sn-1-O-）とアルキル基を明らかにした．16：0，18：1，14：0及び18：0の主要アルキル基のほかに，微量の18：2と20：1が本試料魚より初めて見 いだされた．本法はアルキルグリセロールのキラリティーとアルキル基を同時に決定する便利な方法として 種々の生物試料に利用できると考えられる．%A convenient method for the determination of the stereochemical configuration and alkyl groups of natural 1-O-alkylglycerols was developed. For this purpose, 1-O-alkylglycerols were converted into bis-3,5-dinitrophenylurethane (DNPU) derivatives, followed by chiral-phase high-performance liquid chromatography (HPLC). Complete enantiomer separation was achieved using two columns (25 cm × 4.6 mm i.d., 5 μm particle size) having chiral phases of opposite configurations, N-[(S)-1-(1-naphthyl)ethylaminocarbonyl]-(S)-tert-leucine and N-[(R)-1-(l-naph-thyl)ethylaminocarbonyl]-(R)-tert-leucine, which caused a reversal in the order of enantiomer elution. The analysis was optimized by using a ternary mobile phase, hexane-dichloromethane-ethanol, and detection at 254 nm. Chiral-phase HPLC in conjunction with electrospray ioniza-tion mass spectrometry (ESI-MS) of the derivatives was carried out using an ion-trap mass spectrometer. Post-column addition of 2-propanol was used to assure electrospray ionization in the negative mode. The spectra showed a prominent fragment [M - DNPU]~- ion, by which individual molecular species could be identified. This method was standardized with synthetic 1-O-, 2-O- and 3-O-hexadecyl-sn-glycerols (16 : 0) and was applied to the identification and quantification of individual molecular species of enantiomeric 1-O-alkylglycerols derived from muscle lipids from a deep-sea teleost fish, Stromateus Stellatus. The results clearly showed that the glyc-erol moieties in all of the alkylglycerols have the S-configuration (1-O-alkyl-sn-glycerols), and that the major alkyl groups are 16 : 0, 18 : 1, 14 : 0 and 18 : 0. The method demonstrates that the chiral-phase HPLC in conjunction with ESI-MS provides unambiguous information about the chirality and the alkyl groups of natural alkylglycerols.