缺氧诱导因子-1α上调Cx43表达造成星形胶质细胞损伤的作用机制研究

摘要

目的 研究在糖氧剥夺(OGD)条件下,缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)上调缝隙连接蛋白(Cx43)表达造成星形胶质细胞损伤的作用机制.方法 采用HIF-1α过表达质粒转染星形胶质细胞HA细胞株构建过表达细胞株,HIF-1α小干扰RNA(siRNA-HIF-1α)转染构建低表达细胞株.同时设置对照组(Con),在OGD条件下培养细胞.采用RT-qPCR和Western blot法检测过表达/沉默后HIF-1α和Cx43 mRNA和蛋白水平.CCK-8法检测细胞活力,Annexin-FITC/PI染色后流式细胞术检测细胞凋亡率,试剂盒检测谷氨酸水平,ELISA法检测培养基中炎症因子NO、TNF-α、IL-6水平,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因相关启动子(Bad)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、细胞色素C(Cyt-C)的表达水平.结果 HIF-1α过表达后,OGD条件下,HIF-1α-lent组细胞凋亡率显著高于Con组,细胞中HIF-1α、Cx43 mRNA和蛋白表达水平显著增高,培养基中谷氨酸、NO、TNF-α、IL-6表达水平也显著高于Con组,细胞凋亡相关蛋白Bad、Caspase-3、Cyt-C表达水平均上调,Bcl-2表达水平下调.而HIF-1α沉默后,OGD条件下,siRNA-HIF-1α组细胞凋亡率显著低于Con组,细胞中HIF-1α、Cx43 mRNA和蛋白水平显著降低,培养基中谷氨酸、NO、TNF-α、IL-6表达水平也显著低于Con组,细胞中凋亡相关蛋白Bad、Caspase-3、Cyt-C表达水平均下调,Bcl-2表达水平上调.结论 HIF-1α可以通过调控Cx43的表达,调控缺血缺氧下星形胶质细胞的损伤,这是HIF-1α在缺血性脑病发生、发展中的作用机制之一.