雷公藤内酯醇对Caco-2细胞紧密连接蛋白ZO-1表达的影响

摘要

目的研究雷公藤内酯醇(Triptolide,TL)对人结直肠腺癌细胞Caco-2紧密连接蛋白(Zonula Occludens 1,ZO-1)表达的影响。方法在Caco-2细胞建立肠黏膜屏障体外模型的基础上,通过荧光定量PCR、Western Blot和免疫荧光分析紧密连接蛋白ZO-1的表达变化。结果与对照组相比,TL不同浓度组Caco-2细胞内ZO-1基因和蛋白表达水平无显著变化;TNF-α组ZO-1表达显著降低;在不同浓度TL预保护后加入TNF-α,ZO-1表达水平随加入药物浓度的增加逐渐增加。对照组和TL不同浓度组内ZO-1的免疫荧光染色均表现为整齐、连续且分布规律;TNF-α组荧光强度则明显减弱,单层细胞散架且缺损,位于细胞边界的蛋白染色较模糊,蛋白定位出现弥散和不连续,表达信号减弱;在不同浓度TL预保护后加入TNF-α,ZO-1表达随药物浓度增加逐渐恢复,最高浓度下信号最强。结论TNF-α破坏单细胞层,且抑制ZO-1表达,TL通过ZO-1促进肠黏膜屏障紧密连接恢复。提示TL可能对肠黏膜屏障有一定保护作用。