蓝舌病病毒NS4重组蛋白的纯化及多克隆抗体的制备

摘要

蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)非结构蛋白4(Non-structural protein 4,NS4)拮抗宿主天然免疫。为研究BTV NS4蛋白的功能及基于BTV NS4的检测方法,本研究采用pET-32a-NS4在37℃,0.8 mmol/L IPTG,诱导6 h,超声破碎裂解菌体后纯化融合蛋白,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。经Ni柱亲和纯化后获得大小约27 kD的蛋白,获得的NS4抗体效价在1∶512000以上;纯化后的抗体浓度为1.0 mg/mL,体积为12 mL,抗体纯度大于85%,纯化抗体得率达到8.0 mg以上;Western blot分析可知纯化NS4蛋白多克隆抗体与pET-32a-NS4重组蛋白能产生特异性反应。本研究对BTV NS4重组蛋白进行表达纯化,并成功制备BTV NS4多克隆抗体,为BTV NS4的功能研究及临床应用奠定了基础。