参苓白术散通过IκBα/NF-κB通路调控Lewis肺癌小鼠肿瘤自噬的研究

摘要

目的观察培土生金法代表方参苓白术散对Lewis肺癌小鼠模型肿瘤组织IκBα/NF-κB信号通路以及肿瘤自噬的干预作用,探讨参苓白术散联合顺铂对肺癌的部分治疗机制。方法选取SPF级雄性C57BL/6J小鼠40只,采用腋窝皮下接种肺癌Lewis细胞悬液法建立Lewis肺癌小鼠模型,建模成功后随机分为4组:模型组、顺铂组、中药组和中药+顺铂组,每组10只。模型组给予等量蒸馏水灌胃;顺铂组每周给与腹腔注射顺铂(5 mg·kg^(-1))一次,共2次;中药组每日给与参苓白术散(9.36g·kg^(-1))灌胃一次,连续14天;中药+顺铂组每日给与参苓白术散(9.36g·kg^(-1))灌胃一次,连续14天,同时每周给与腹腔注射顺铂(5mg·kg^(-1))一次,共2次。给药14天后,测定各组小鼠肿瘤体积,并计算相对肿瘤体积和相对肿瘤增殖率;采用ELISA法测定肿瘤组织中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-1(interleukin-1β,IL-1β)的含量;采用透射电镜观察肿瘤细胞超微形态的变化;采用免疫组化法测定核因子κB抑制蛋白α(NF-kappa-B inhibitor alpha,IκBα)和核因子-κB(nuclear factor-κ-gene binding,NF-κB)P65的蛋白表达水平;采用Western blot法测定自噬相关基因3(autophagy related gene 3,Atg3)、自噬相关基因5(autophagy related gene5,Atg5)、自噬特异性基因(Beclin-1)和微管相关蛋白1轻链3(Microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)的蛋白表达水平。结果与模型组比较,顺铂组、中药组、中药+顺铂组小鼠肿瘤体积和相对肿瘤体积显著减小(P<0.01),肿瘤组织TNF-α、IL-1β含量显著降低(P<0.01),IκBα蛋白表达水平显著升高(P<0.01)、NF-κB P65蛋白入核率显著降低(P<0.01),Atg3、Atg5、Beclin-1和LC3II/LC3I的蛋白表达水平显著升高(P<0.01),和顺铂组比较,中药组和中药+顺铂组肿瘤组织TNF-α、IL-1β含量显著降低(P<0.01),中药+顺铂组肿瘤组织LC3II/LC3I的蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。结论参苓白术散能够上调IκBα蛋白表达,抑制NF-κB的激活,降低肿瘤组织中促炎因子TNF-α、IL-1β的含量,调控肿瘤组织炎症反应,改变肿瘤微环境,并上调肺癌组织Atg3、Atg5、Beclin-1和LC3II/LC3I的蛋白表达水平,激活肿瘤发生自噬,抑制肿瘤的生长。