抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因的克隆及其原核表达载体的构建

摘要

目的克隆抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因(VH),并构建其原核表达载体.方法从能分泌抗人膀胱癌单克隆抗体的杂交瘤细胞BDI-1中提取总RNA,通过RT-PCR扩增出VH cDNA.用HindⅢ和Xho Ⅰ酶切纯化的RT-PCR产物和原核表达载体pET28a(+),在T4 DNA连接酶作用下室温连接.重组质粒经酶切鉴定,阳性克隆测序并进行序列分析.结果扩增出VHcDNA片段,大小约为370bp,重组质粒的酶切鉴定结果与预期一致.VH基因序列长度为366bp,编码122个氨基酸.VH基因属于鼠免疫球蛋白重链Ⅱ亚类.结论成功克隆出抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因,并成功构建其原核表达载体.