传统煎法与现代煎药机制备三黄汤的高效液相色谱法指纹图谱

摘要

目的:探讨采用高效液相色谱法(HPLC)分析三黄汤传统煎法和现代煎药机法的指纹图谱差异。方法:选取10个不同批次的三黄汤配方,配制传统煎法三黄汤供试品溶液和现代煎药机三黄汤供试品溶液,色谱条件采用4.6 mm×250 mm的DIAMONSIL C 18保护柱(5μm),以30℃为柱温,进样量为15μL,以甲醇为流动相A,1%磷酸水为流动相B,检测波长为277 nm,进行HPLC指纹图谱对比研究。结果:三黄汤专属性良好。线性关系考察显示黄芩苷回归方程Y=75.64 X+21.31,r=0.9998(n=5),黄芩苷对照品范围在0.5~12.0μg/mL,线性考察结果显示线性关系良好。精密度结果最终取大于总峰面积5%的色谱峰相对峰面积RSD平均值1.776%,三黄汤供试品溶液精密度良好。稳定性结果显示色谱峰相对峰面积RSD平均值1.843%,三黄汤供试品溶液24 h内稳定性良好。重复性试验结果显示色谱峰相对峰面积RSD平均值1.911%,三黄汤的重复性良好。加样回收率检测结果显示平均回收率99.81%,RSD 1.79%,高相液相检测方法所测加样回收率结果可靠。样品测定结果显示在同一色谱洗脱梯度下,传统煎法的三黄汤指纹图谱120 min即完成检测,而现代煎药机法制备的三黄汤指纹图谱在131.87 min才完成检测;另外从图谱中可见现代煎药机制备的三黄汤中色谱峰更多,可能与现代煎药机的高压煎煮设备能析出更多共有峰有关。从各自的指纹图谱相似度中可得,10批传统煎法三黄汤的相似度和10批现代煎药机法三黄汤的相似度均高于0.9,其中传统煎法平均相似度为0.9714,现代煎药机法平均相似度为0.9816,略高于传统煎法。结论:传统煎法和现代煎药机法制备的三黄汤的HPLC指纹图谱存在一定差异。