光皮树无性系ISSR-PCR反应体系的建立

摘要

以光皮树基因组DNA为材料,采用单因素实验,测试了退火温度、模板用量、dNTP浓度、Taq酶用量、Primer浓度、Buffer用量和Mg2+浓度等因素对ISSR-PCR的影响.优化的反应体系和条件:总体系为25 μL,引物0.2 μmol/L,模板20 ng、Mg2+2.5 mmol/L、Taq酶0.5 U、dNTP为0.1 mmol/L和Buffer为2.5 μL.扩增程序:94 C预变性5 min,1个循环;94 C变性50s,52 C退火1 min,72 C延伸1.5 min,40个循环;72C后延伸10min,1个循环.该体系的建立为今后利用ISSR进一步研究光皮树遗传连锁图谱构建、遗传多样性、种质资源鉴定与和基因定位奠定了技术基础.