人可溶性白介素-1受体真核表达载体pcDNA3/sIL-1R的构建

摘要

目的本研究旨在构建人可溶性白介素-1受体(sIL-1R)真核表达载体pcDNA3/sIL-1R,为研究骨关节病的基因治疗奠定实验基础.方法将人sIL-1R基因的RT-PCR纯化产物及质粒pcDNA3.1(+) DNA经KpnI和XhoI双酶切、胶回收纯化酶切片段后,体外连接酶切片段,使其定向重组,再将重组DNA转化E.coli Competent Cells JM109,经复苏后,在含Ampr的LB固体培养基上筛选出阳性克隆.结果挑取的LB固体培养基上的6个单菌落经酶切及测序鉴定,证实均为阳性克隆,即sIL-1R与pcDNA3.1(+)体外重组成功.结论采用体外重组技术,成功地将人sIL-1R cDNA插入了真核表达载体pcDNA3.1(+)中.