牛病毒性腹泻病毒基因组cDNA文库的构建

摘要

以牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）ＩｎＬ株的基因组ＲＮＡ为模板，经逆向转录酶作用，合成第一链ｃＤＮＡ，再以ＲＮａｓｅ／Ｈ与ＤＮＡ聚合酶Ｉ联合作用合成ｄｓｃＤＮＡ，并以ｄＣ同聚物尾化。ｐＵＣ８ＤＮＡ在ＰｓｔＩ酶解后，以ｄＧ同聚物尾化，两者退火构成重组质粒，转化到Ｅ．ｏｏｌｉＪＭ１０１受体菌中。另以γ－￣（３２）Ｐ－ＡＴＰ标记ＢＶＤＶＲＮＡ制备探针，通过菌落原位杂交筛选重组子。酶切分析表明重组质粒插入片段最长接近１２ｋｂ。该片段含有ＥｃｏＲⅠ，ＨｉｎｄⅢ、ＢａｍＨⅠ的酶切位点，此ｃＤＮＡ文库基本上包括了ＢＶＤＶ基因组。