汉坦病毒核壳蛋白重组抗原的制备和基因分型的研究

摘要

根据HFRSV汉滩型（HTN）代表株76－118和汉城型（SEO）代表株R22基因资料，设计了两组引物，用电脑软件分析证明设计符合引物标准。以一组引物克隆全长S基因片段和N端的部分S基因片段，并使它们在T7系统进行融合表达和非融合表达。非融合表达产量虽不及融合表达高，但生物活性好。以非融合表达的两个S基因片段产物作间接ELISA的包被抗原，其工作浓度均达1：100000用另一组引物建立了逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR），检测我国不同地区由8种主要宿主分离的37个HFRSV毒株，2个阳性标准对照毒株和5个阴性对照标本，并与cELISA法比较，二者阳性检出率分别为100％和84．6％，符合率为84．6％，但前者比后者敏感性高15．4％。对其中20个毒株的PCR扩增产物先后用RsaⅠ和HindⅢ作二级酶切，建立了逆转录-聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析（RT-PCR－RFLP）分型法。被定为HTN型的9株，SEO型的8株，余3株未能定型。此20个毒株曾用血清学方法分型，仅11株分型成功．与RT-PCR－RFLP法结果符合。分型成功率RT-PCR－RFLP法比血清法高30％。