汉坦病毒陈株S基因编码区的克隆、序列分析及表达

摘要

从汉坦病毒陈株感染的ＶｅｒｏＥ６细胞裂解液中提取病毒ＲＮＡ，经逆转录ＰＣＲ获得病毒Ｓ基因编码区约１．３ｋｂｃＤＮＡ片段，克隆该片段后进行核苷酸序列测定，并与汉坦病毒７６１１８株进行同源性比较，结果二者核苷酸序列同源性为８６％，推导的氨基酸序列同源性为９７％。将该基因片段插入原核表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ１，在大肠杆菌中获得高效表达。表达产物为ＧＳＴＮＰ融合蛋白。ＳＤＳＰＡＧＥ检测表达蛋白分子约７２ｋＤ左右。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ和ＥＬＩＳＡ试验结果表明，表达产物可与多株抗汉坦病毒核蛋白的ＭｃＡｂ发生反应，其抗原表位及ＭｃＡｂ反应谱与７６１１８株相比存在某些差异。