草鱼呼肠孤病毒(GCRV)部分基因片段cDNA文库的构建

摘要

在随机六聚体引物浓度不变条件下 ,分别采用 0 .5、2、5μg草鱼呼肠孤病毒 (GCRV)单一片段RNA进行反转录cDNA合成及文库构建。结果表明 ,在GCRV RNA模板浓度大于 2 μg时 ,第二链cDNA合成产物可直接通过EB染色的琼脂糖凝胶电泳进行定量及鉴定。选择cDNA与载体连接比率为 5∶1,在高效电转化条件下 ,可获得 10 6 转化子 /μgcDNA的转化效率。阳性克隆子经酶切及PCR鉴定 ,约 4 5%以上的插入片段大于 50 0bp。