肝癌细胞微小RNA-100对细胞有丝分裂的影响

摘要

目的:探讨微小RNA(micro RNA-100,miR-100)对人肝癌HepG2细胞有丝分裂的影响。方法:采用实时荧光定量PCR法检测HepG2细胞中miR-100和Polo样激酶1(Polo-like kinase1,Plk1)mRNA的相对表达水平。以脂质体介导的方法将化学合成的带有Cy3荧光标记的miR-100模拟物瞬时转染至HepG2细胞,采用FCM法检测磷酸化组蛋白H3(phospho histone H3,PHH3)标志的转染后细胞的有丝分裂指数,光学显微镜观察细胞的有丝分裂情况,免疫细胞化学法分析转染后细胞中Plk1蛋白表达的变化。结果:同正常肝细胞比较,肝癌HepG2细胞的miR-100水平降低(P<0.05),而Plk1mRNA水平明显升高(P<0.01)。在转染miR-100模拟物48h后,显微镜下可见有丝分裂细胞数较对照组明显减少,且细胞有丝分裂指数明显低于对照组细胞[(0.62±0.48)%vs(10.34±0.77)%,P<0.01]。同对照组相比,miR-100转染组细胞中Plk1mRNA水平在转染后48h时显著降低(P<0.01),且有丝分裂中晚期和末期位于细胞核内的Plk1蛋白基本消失。结论:肝癌细胞中miR-100水平升高可导致细胞有丝分裂阻滞,这可能与细胞核内Plk1蛋白缺失密切相关。