p53C—末端356—393氨基酸对人肺癌细胞恶性表型的影响

摘要

目的：根据p53蛋白中心区与特殊DNA序列结合活性，受到C－末端氨基酸负面影响，研究去掉C－末端氨基酸残基外源p53，是否增加对人肺癌细胞恶性生长的抑制。方法；利用DNA重组技术，构建去掉C－末端356－393区37个氨基酸p53和全工p53的真核细胞表达质粒，（PEGFP－p53(del),PEGFP-p53)。经lipofectin介导转染有p53缺失和突变的人肺癌细胞801D，G418筛选，建立单克隆转染细胞系，PCR检测外源基因，镜检细胞绿色荧光（GFP）蛋白表达，细胞集落形成试验检测细胞体外恶性增殖能力。FAX检测细胞周期，行裸鼠移植瘤试验检测细胞体内恶性增殖能力。结果：获转染细胞克隆系PEGFP－p53(del)-801D、PEGFP－p53-801D。PEGFP－801D．PCR证明外源基因在细胞中存在，镜检证明绿荧光蛋白在细胞中表达。体外集落形成实验证明PEGFP-p53(del)-801D集落形成抑制率为99．6％，PEGFP－p53-801D为81％。PEGFP-p53(del)-801D细胞恶性增殖能力明显低于PEGFP-p53-801D。P＜0．01。裸鼠移植瘤实验证明PEGFP-p53(del)-801D和PEGFP-p53-801D恶性增殖增殖能力明显降低。PEGFP-p53(del)-801D移植瘤细胞中可检测出绿荧光蛋白表达，证明外源p53(del)基因在肿瘤中存在和表达，也显示出PEGFP-p53(del)-801D和PEGFP-p53-801D仍有活的癌细胞存在。结论：去掉C－末端356－393氨基酸残基外源p53明显增加对801D细胞体外恶性增殖抑制。801D细胞对外源p53抑癌作用存在“异质性”。