5F11-DOX结合物对人肺腺癌细胞体内外抑制作用的研究

摘要

目的 研究单克隆抗体-化疗药物结合物5F11-DOX对人肺腺癌A2细胞体内外的抑制作用及其可能的作用机制。方法 戊二醛法制备5F11-DOX结合物；集落形成试验观察结合物对肿瘤细胞的体外杀伤作用；荧光显微镜观察DOX在肿瘤细胞中的分布；免疫组化检测抗体在细胞的结合部位及分布；裸鼠皮下或腹腔内人肺癌A2细胞异种移植瘤，尾静脉给药，比较不同剂量的5F11-DOX结合物与游离DOX对A2细胞异种移植瘤的疗效。结果 浓度为0．04ug/d的5F11-DOX即可在体外杀死全部人肺腺癌A2细胞，5F11-DOX结合物比游离DOX的作用提高了10倍(P<0．05)。荧光镜检发现在DOX浓度为3ug／ml作用3小时，去除药物，继续培养24小时后，5F11-DOX组的DOX荧光比游离DOX组的强。显示结合物组的DOX在细胞内的保留时间比游离DOX组的更长。免疫组化染色检测发现5F11-DOX孵育后5F11定位于细胞膜与胞浆中，而荧光镜检发现．DOX分布于细胞浆及核内。提示5F11-DOX复合物主要通过抗体的靶向性将药物带到靶细胞的膜表面并内化进入细胞，而后结合物在细胞内解离，DOX分布于胞浆及核内，杀伤癌细胞。结合物大分子进入细胞内，从而影响DOX药物从细胞内泵出。裸鼠皮下及腹腔内异种移植瘤治疗试验显示5F11-DOX组裸鼠的移植瘤明显小于对照组和同剂量游离DOX组(P<0．05)；5F11-DOX疗效相当于4-8倍之游离DOX的疗效。瘤体的病理切片HE染色显示，5F11-DOX结合物组癌巢中央和周围均有大片的瘤组织溶解。结论 5F11-DOX结合物对人肺癌A2细胞瘤的杀伤作用显著高于游离的DOX，体外杀伤作用约提高10倍左右，体内对A2细胞异种移植瘤的疗效比游离DOX组提高4-8倍。