M2型巨噬细胞外泌体对小鼠自身免疫性肝炎的保护作用

摘要

目的 探究M2型巨噬细胞来源的外泌体(M2 Exos)对刀豆蛋白A(Con A)诱导的小鼠自身免疫性肝炎(AIH)的保护作用.方法 采用IL-4(20μg/L)刺激RAW264.7巨噬细胞24 h后提取M2 Exos并用透射电子显微镜、纳米颗粒跟踪分析技术和蛋白质免疫印迹对其进行鉴定;免疫荧光观察RAW264.7巨噬细胞对M2 Exos的摄取情况.将12只C57BL/6J小鼠随机分为PBS组、DiR-M0 Exos组、DiR-M2 Exos组和DiR染料对照组.Con A(15 mg/kg)注射完成1 h后通过尾静脉分组注射PBS溶液、DiR-M0 Exos(100μg)、DiR-M2 Exos(100μg)和DiR染料,活体成像技术观察Exos在AIH小鼠肝、脾、心、肺、肾、肠的分布情况.将20只C57BL/6J小鼠随机分为Control组(PBS溶液)、Con A组(15 mg/kg Con A),M0 Exos组(15 mg/kg Con A+200μg M0 Exos)和M2 Exos组(15 mg/kg Con A+200μg M2 Exos),每组5只.Con A注射完成12 h后处死小鼠,收集外周血和肝组织,全自动生化仪测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏病理形态变化;实时荧光定量PCR(qPCR)检测肝组织肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的mRNA表达水平;流式细胞术检测肝脏巨噬细胞亚群变化情况.结果 成功诱导并分离了M2 Exos,可被RAW264.7巨噬细胞摄取;经尾静脉注射后,M2 Exos主要在小鼠肝脏和脾脏中蓄积.与Control组相比,Con A组小鼠血清ALT和AST明显升高(P<0.05),肝脏结构紊乱,肝细胞大片坏死,肝组织TNF-α和IL-6 mRNA表达升高(P<0.05),肝脏单核细胞来源巨噬细胞(MoMFs)的浸润增多(P<0.05).与Con A组相比,M2 Exos组小鼠血清ALT和AST水平显著下降(P<0.05),肝脏坏死明显减轻,肝组织TNF-α和IL-6 mRNA表达降低(P<0.05),肝脏MoMFs的浸润减少(P<0.05).结论 M2 Exos可对小鼠AIH起到保护作用,其作用机制可能与降低肝脏炎性细胞因子的表达及减少对MoMFs的招募有关.