人胰岛细胞自身抗原69ku蛋白基因的分离及重组质粒鉴定

摘要

目的:应用聚合酶链技术获取作为基因探针和体外表达研究所必需的人胰岛细胞自身抗原69ku蛋白(hICA69)编码基因,为探讨该基因在不同种系间和(或)组织来源间的差异打下基础.方法:分别从正常白人胰腺细胞和国人胰岛细胞瘤Poly(A+)-RNA中逆转录合成编码人胰岛细胞自身抗原69ku蛋白(hICA69)的全长cDNA,以双链cDNA(dscDNA)为模板,经聚合酶链反应(PCR)特异性扩增出hICA69基因的编码序列.利用基因重组技术,将纯化的目的基因插入pSPORT1质粒的多克隆位点,经限制性内切酶加以初步鉴定.结果:成功地扩增了hICA69基因,并正确地克隆进pSPORT1载体,酶切鉴定筛选出正向插入重组子,其结果与预期值一致.结论:hICA69基因的克隆为应用基因工程技术生产胰岛细胞自身抗原、生产适用于1型糖尿病诊断的试剂盒打下一定的基础.