重组人2型松弛素对人支气管上皮Bease-2B细胞上皮-间质转化的抑制作用的时间相关性研究

摘要

目的:通过体外细胞实验探索重组人2型松弛素(RLN2)参与抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导支气管上皮细胞Bease-2B细胞的上皮-间质转化(EMT)过程.方法:本研究选取Bease-2B细胞株作为模式细胞,体外培养.1)通过观察细胞形态变化初步确定TGF-β1诱导浓度以及RLN2对TGF-β1诱导的Bease-2B细胞EMT的有效干预浓度;2)RLN2抑制TGF-β1诱导Bease-2B细胞EMT的时间:将细胞分别于TGF-β1诱导的同时和诱导24小时后加入RLN2培养24小时,及在TGF-β1诱导24小时后加入RLN2组分别作用24小时和48小时后:①通过观察细胞迁移能力推测RLN2不同作用时间对TGF-β1诱导的细胞EMT抑制效果;②通过Western bloting法检测各组间质标志ACTA2,上皮标志E-Cadhrin表达情况分析抑制效果与作用时间的关系.结果:1)观察细胞形态变化:与正常组比,10ng/mL TGF-β1诱导组Bease-2b细胞由铺路石状上皮形态逐渐变成梭形、针叶型,且细胞之间的间隙变大,胞间的连接变得松散;加不同浓度的RLN2抑制细胞48小时后,与单纯TGF-β1组相比,梭形形态的细胞减少,部分恢复铺路石状上皮形态,但细胞间连接仍然松散,其中TGF-β1同时加RLN280ng/mL组表现明显.2)迁移能力,各组与单纯TGF-β1诱导组比较平均迁移距离均减小,诱导24小时后加RLN2抑制组比诱导抑制同时进行的组的迁移距离大,诱导24小时后加RLN2培养48小时组比抑制24小时组迁移距离小.3)Western bloting检测分析抑制效果与时间的关系:单纯RLN2组和正常组比较E-Cadhrin和ACTA2蛋白的表达均无显著性差异;各组与单纯TGF-β1组比较E-Cadhrin表达量均增加,ACTA2蛋白的表达减少;诱导抑制同时进行的组与诱导24小时后加RLN2抑制组比较E-Cadhrin表达量增加,ACTA2蛋白的表达减少;诱导24小时后加RLN2培养48小时抑制组比抑制4小时组ACTA2蛋白的表达少,E-Cadhrin表达量无差别.结论:①TGF-β1可诱导支气管上皮细胞转分化为间质细胞.②松弛素可在一定程度上抑制TGF-β1诱导的EMT过程且与作用时间相关.③松弛素可能通过抑制TGF-β1诱导的EMT过程发挥抗纤维化作用.