坏死梭杆菌白细胞毒素基因SH片段的克隆与表达

摘要

坏死梭杆菌白细胞毒素是坏死杆菌病的主要致病因子,白细胞毒素基因(lkt)是其编码基因.以分离到的国内牛源坏死梭杆菌FN(A)菌株F4基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增白细胞毒素基因sH片段,克隆至pMD18-T载体上,以BamH I和HindⅢ酶切的目的片段sH与相应酶切的pET32a载体连接构建pET32a-sH重组表达质粒,经转化E coli BL21(DE3)后用IPTG进行蛋白诱导,SDS-PAGE检测重组蛋向表达情况.结果表明:扩增基因序列大小为1800 bp,SDS-PAGE检测重组蛋白有效表达,表达得到大小为80.2 kDa的目的蛋白,采用镍柱亲和层析方法纯化SH重组蛋白,获得了纯度达95%的重组蛋白;经Western-blot证实,该蛋白对抗坏死杆菌阳性血清具有反应活性.