坏死梭杆菌白细胞毒素基因的BSBSE片段的原核表达及抗血清制备

摘要

本研究以国内分离的牛源坏死梭杆菌F4基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增BSBSE片段,克隆到pMD18-T载体上,鉴定并测序正确后,构建pET32a-BSBSE表达质粒,转化E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导、SDS-PAGE检测重组蛋白表达、Western blot检测重组蛋白反应原性.以该重组蛋白免疫兔制备抗血清,经间接ELISA检测抗血清效价.结果表明,PCR扩增得到1 100 bp的BSBSE片段,以此片段构建了pET32a-BSBSE表达质粒,经诱导后获得了目的蛋白表达,以Western blot检测该重组蛋白证明为本研究的目的蛋白,并且与抗体具有反应原性.以间接ELISA检测该重组蛋白免疫兔制备的抗血清效价达105.研究结果将为坏死梭杆菌毒力因子(1kt)的深入研究奠定了物质基础.