Cloning and Expression of the Leukotoxin Gene SH from Fusobacterium necrophorum

摘要

坏死梭杆菌白细胞毒素是坏死杆菌病的主要致病因子,白细胞毒素基因(lkT)是其编码基因。以分离到的国内牛源坏死梭杆菌fn(A)菌株f4基因组dnA为模板,应用PCr方法扩增白细胞毒素基因SH片段,克隆至PMd18-T载体上,以bAMHⅠ和HIndⅢ酶切的目的片段SH与相应酶切的PET32A载体连接构建PET32A-SH重组表达质粒,经转化E COlI bl21(dE3)后用IPTg进行蛋白诱导,SdS-PAgE检测重组蛋白表达情况。结果表明:扩增基因序列大小为1800bP,SdS-PAgE检测重组蛋白有效表达,表达得到大小为80.2kdA的目的蛋白,采用镍柱亲和层析方法纯化SH重组蛋白,获得了纯度达95%的重组蛋白;经WEST-Ern-blOT证实,该蛋白对抗坏死杆菌阳性血清具有反应活性。