睾丸和卵巢打点注射pIRES2-EGFP质粒生产转基因兔的研究

摘要

为探讨直接用注射器对睾丸和卵巢打点注射pIRES2-EGFP质粒转染兔的精子细胞和卵母细胞,建立操作方便、效率高、成本低、可批量生产转基因兔的可行性.选择5只成年新西兰雄兔、29只经产新西兰雌兔,每侧睾丸和卵巢内分别打点注射 0.5 ～0.8 mg/mL质粒 0.25 mL.①第3周随机取一只雄兔睾丸做冰冻切片,于荧光显微镜下观察转染情况.②(Ⅰ: 1#♂×7♀、Ⅱ: 2#♂×7♀、Ⅲ: 3#♂×7♀、Ⅳ: 4#♂×7♀)其它雄兔于第6周和第7周与3日前做过卵巢注射并超排处理的雌兔配种,最后采集新生仔兔耳组织,提取基因组DNA,经PCR和Southern杂交检测阳性率.结果显示雄兔睾丸冰冻切片于荧光显微镜下可见绿色荧光,统计所得后代转基因阳性率,并进行差异分析,其中 Ⅰ组后代阳性率最高,PCR和Southern杂交检测阳性率为93.55 %和83.87 %,Ⅳ后代阳性率最低,依次为80.65 %和70.97 %,但是各组之间差异不显著.上述实验结果表明,对睾丸和卵巢同时注射外源基因可获得较高阳性率的转基因后代,生产转基因的方法操作简便、高效,为日后大规模制备一些大型家畜的转基因后代奠定了基础.