中国兰SRAP-PCR体系的建立及优化

摘要

序列相关扩增多态性(SRAP)是新一代的分子标记技术,尚未在兰花中应用过.本实验运用改进了的CTAB法提取国兰总DNA,并L16(45)正交设计,对影响中国兰PCR反应的4个因素(引物浓度、Mg2+浓度、dNTPs 浓度、扩增模版)在4个水平上进行优化试验,结果采用DPS软件分析.结果表明,在25 μl总体积中,Taq酶为1个单位的情况下,中国兰SRAP-PCR反应最佳扩增体系为: Mg2+ 2 mmol·L-1、DNA模版100 μg、dNTPs 0.25 mmol·L-1、引物0.3 μmol·L-1.这一优化的SRAP-PCR体系的建立为后续国兰SRAP分析奠定基础.