龙爪槐SRAP-PCR反应体系的建立与优化

摘要

以龙爪槐(Sophora japonica f.pendula Hort.)叶片为材料,采用L16 (45)正交设计试验,对SRAP-PCR反应体系中的Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物和模板DNA用量5个因素进行优化,并确立适用于龙爪槐SRAP-PCR反应的最佳体系.结果表明,龙爪槐SRAP-PCR反应的最佳体系为反应总体积12.5 μL,Taq酶0.10U、Mg2+3.0 nmoL/L、dNTPs 2.5 nmol/L、正反向引物均为1.2 nmoL/L、DNA 100 ng,其余体积用ddH20补足.各因素水平变化对反应体系的影响影响大小依次为引物、模板DNA、Mg2+、dNTPs、Taq酶.用35个龙爪槐样品对优化体系进行验证,均得到条带清晰、多态性丰富的图谱,证实了该体系的稳定性.