嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA2991的原核表达、纯化与免疫原性研究

摘要

【目的】评价嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA2991的免疫学功能,为探索嗜水气单胞菌渔用疫苗候选抗原提供理论依据。【方法】通过生物信息学分析AHA2991氨基酸序列,揭示不同菌株间的亲缘关系;分子克隆构建AHA2991表达菌株并确定最佳诱导条件;包涵体洗涤及SDS-PAGE切胶纯化获得AHA2991并免疫红鲫;Western blotting检测AHA2991红鲫血清的特异性与效价;ELISA模拟AHA2991红鲫血浆与嗜水气单胞菌的体外相互识别作用;酸性、碱性磷酸酶(ACP、AKP)测定与细胞吞噬作用评价AHA2991非特异性免疫功能;组织病理学切片探究AHA2991免疫对红鲫内脏的影响情况。【结果】AHA2991蛋白家族在不同菌株间具有同源性,不同菌株间亲缘关系较近,尤其在气单胞菌间亲缘关系更近;AHA2991的最佳诱导条件为:菌液浓度OD600=1.0,IPTG终浓度0.1 mmol/L,在28℃下诱导8 h。红鲫AHA2991抗血清具有良好的特异性,其效价为1∶800;体外AHA2991血浆对嗜水气单胞菌具有识别作用,滴度可达1∶3200;ACP、AKP指标及细胞吞噬作用均显示AHA2991激活红鲫非特异性免疫;组织病理学切片表明AHA2991免疫对红鲫内脏结构无影响。【结论】嗜水气单胞菌AHA2991具有良好的免疫原性,有望成为嗜水气单胞菌渔用疫苗的候选抗原成分。