clock基因干扰质粒的构建及干扰效率测定

摘要

目的:构建 clock 基因的干扰质粒,为深入研究 clock 基因在信号转导通路中的作用提供有效手段.方法:采用M-folder生物软件选择2个 clock 基因干扰位点,并根据3个干扰片段及一个阴性对照片段,定向克隆到pGenesil-1干扰载体并测序验证.将干扰质粒及对照质粒分别转染至NIH3T3细胞,并通过检测RT-PCR产物量以获得干扰效率.结果:RT-PCR产物检测结果显示干扰质粒pGenesil-1/clock-Ⅱ干扰效率最高,其 clock 表达量降低了74%,而pGenesil-1/clock-Ⅰ干扰组 clock 表达量只降低了2%.结论:成功构建了对 clock 基因具有显著干扰效率的pGenesil-1/clock-Ⅱ干扰质粒,为进一步研究 clock 基因的功能奠定了基础.