运动神经末梢显示方法探讨

摘要

中枢神经系统的传出神经纤维终止于骨骼肌,与肌纤维紧贴构成运动终板,一般常采用镀金压片方法显示.现将我们的改进方法体会简述如下.第一种方法:取材:以狗、猫、大小白鼠、荷兰猪、家兔肋间肌分别作了比较试验,我们认为以家兔肋间肌组织最好,以刚生下来3hr左右的家兔最理想.取家兔第二肋间肌用剪子剪成小碎块,还可以将肋骨连同肋间肌一起剪下来绑在载玻片上,先投入25%蚁酸40～50min,从蚁酸取出去掉玻片用干净的滤纸吸去多余蚁酸,再入1 %氯化金1hr,用滤纸吸取多余氯化金,再入5%蚁酸6～24hr,压片,在显微镜下有运动终板为止.第二方法:固定剪成小碎块组织,先入1%氯化金浸染.1%氯化金8ml ,蚁酸2ml,两者混合后煮沸,冷却过滤使用.肋间肌浸染20min～2hr,吸去多余蚁酸用蒸馏水洗,用纯甘油透明三次,甘油保存.取小块肌肉顺肌纤维方向用载片或用盖片轻轻压平,镜下观察,找到较完整运动终板为止.用PVP封片或用甘油明胶封片,PV P封片可长久保存.rn结果:神经纤维和运动终板呈褐黑色.被压开的染上氯化金的骨骼肌纤维为粉红色或淡兰紫色,神经纤维染成黑色,一条神经沿途分支可分布于多条肌纤维,每条肌纤维到达肌膜时失去髓鞘,其末端分散成爪状形成终板,我们的体会是(1)幼兔第二肋间肌运动终板多易浸染 ,取材要新鲜,取材时将肋间肌周围的结缔组织剥离干净,取肋间肌中间肌肉.(2)浸蚁酸时间不易过长以免使运动终板不完整.反之肌纤维散不开,严格掌握是关键.(3)配成1% 氯化金呈金黄色液体,不要用过期的氯化金,配好后液体入冰箱保存,外包黑纸,染色过程要严格避光.(4)氯化金是贵重药品,配时必须将瓶子用洗涤液浸泡冲洗干净,要求一次配制成功.(5)浸染组织所用摄子最好用竹筷子或摄子上涂上层蜡.rn附:PVP配方:取聚乙烯吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolldone,P VP)10克,蒸馏水10～15ml在配制时用玻璃棒搅拌,出现很多小泡,静止后使用 ,入冰箱保存使用.rn甘油明胶配法:明胶5～6g,甘油1～2ml,蒸馏水28ml,置45℃恒温箱自然溶解.