背部皮下注射过表达ZFP580基因转染的EPCs介导裸鼠局部血管生成情况观察

摘要

目的观察过表达ZFP580基因对内皮祖细胞(EPCs)介导的裸鼠局部血管生成的影响。方法采用Ficoll密度梯度离心法分离提取大鼠骨髓来源的EPCs,以腺病毒为载体构建过表达ZFP580基因质粒(Ad-ZFP580)、低表达ZFP580基因质粒(Ad-siZFP580)。将EPCs分为Ad-ZFP580组、Ad-siZFP580组、过表达病毒空载质粒(Ad-NC)组、低表达病毒空载质粒(Ad-si-scrambled)组,并分别转染Ad-ZFP580(MOI=10)、Ad-siZFP580(MOI=50)、Ad-NC、Ad-si-scrambled(后两组为对照组),qRT-PCR、Western blotting法检测各组转染的EPCs中ZFP580 mRNA及蛋白相对表达量,证实腺病毒成功转染EPCs。分别将各组转染的EPCs细胞悬液与Matrigel胶混合,并注射至裸鼠的背部皮下,7 d后取裸鼠背部皮下胶体,采用HE染色观察裸鼠背部皮下胶体血管管腔生成数目,免疫组化vWF染色检测管腔vWF阳性结构数目。结果Ad-ZFP580组、Ad-NC组胶体中血管管腔生成数目分别为(4.83±0.75)、(2.00±0.63)个,Ad-siZFP580组、Ad-si-scrambled组胶体中血管管腔生成数目分别为(0.50±0.55)、(2.17±0.41)个,Ad-ZFP580组、Ad-NC组比较,Ad-siZFP580组、Ad-si-scrambled组比较,P均<0.05。Ad-ZFP580组、Ad-NC组胶体中胶体中血管管腔的vWF阳性结构数目分别为(4.67±0.82)、(1.83±0.41)个,Ad-siZFP580组、Ad-si-scrambled组胶体中胶体中血管管腔的vWF阳性结构数目分别为(0.67±0.52)、(1.83±0.75)个,Ad-ZFP580组、Ad-NC组比较,Ad-siZFP580组、Ad-si-scrambled组比较,P均<0.05。结论过表达ZFP580基因可增加EPCs介导的裸鼠局部血管管腔生成数目及管腔vWF阳性结构数目,相反则抑制,其可能在EPCs介导的血管生成过程中起着重要调控作用。