TGF-β1对大鼠肾小球系膜细胞纤维化蛋白及长链非编码RNA uc.412表达的影响

摘要

目的 观察转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠肾小球系膜细胞纤维化蛋白的影响,并探讨其对长链非编码RNA uc.412(lncRNA uc.412)的调控作用.方法 体外培养肾小球系膜细胞,将细胞随机分为3组,对照组仅加入培养基,TGF-β1组加入TGF-β1,TGF-β1+SIS3组同时加入TGF-β1和TGF-β下游蛋白Smad3磷酸化特异性抑制剂SIS3,干预24 h.采用Real-time PCR法检测各组lncRNA uc.412表达;Western blotting法检测各组细胞纤维化相关蛋白1型胶原蛋白(Collagen-1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、p-Smad3蛋白表达.利用慢病毒过表达lncRNA uc.412后转染肾小球系膜细胞细胞,建立lncRNA uc.412过表达组,并设病毒空载组和正常对照组.采用Real-Time PCR法检测Collagen-1、α-SMA mRNA表达,Western blotting法检测Collagen-1、α-SMA蛋白表达.结果 与对照组相比,TGF-β1组lncRNA uc.412表达升高(P<0.01),Collagen-1、α-SMA及p-Smad3蛋白表达升高(P均<0.05);与TGF-β1组相比,TGF-β1+SIS3组lncRNA uc.412表达下调(P<0.01),Collagen-1、α-SMA及p-Smad3蛋白表达降低(P均<0.05).构建lncRNA uc.412过表达系膜细胞模型后,与对照组比较,过表达组α-SMA、Collagen-1蛋白及mRNA表达均升高(P均<0.05).结论 TGF-β1通过下游Smad3信号通路上调lncRNA uc.412表达,诱导肾小球系膜细胞纤维化蛋白表达增加.