GATA4基因慢病毒载体构建与鉴定

摘要

目的 构建锌指转录因子4(GATA4)基因慢病毒载体并鉴定.方法 设计2条GATA4基因siRNA干扰序列,与双酶切后的pMGic7.1载体连接.将构建的GATA4基因慢病毒载体转染293T细胞,随机分为实验组、阴性对照组、空白对照组,采用Western bloting法检测GATA4蛋白表达,采用RT-qPCR法检测GATA4 mRNA表达.结果 pMGic7.1载体可与其中1条siRNA干扰序列正确连接,其基因序列如下:CGAAACACCGGGGACATAAT-CACTGCGTAATCCTCGAGGATTACGCAGTGATTATGTCCTTTTTTGAATTCGGA(黑体部分为siRNA干扰序列),符合实验要求.空白对照组未添加目的基因,在45 kDa处无蛋白条带;实验组GATA4蛋白相对表达量为0.739±0.056,阴性对照组为0.997±0.001,两组比较P<0.05.实验组GATA4 mRNA相对表达量为0.362±0.024,阴性对照组为0.998±0.001,空白对照组为0.812±0.001,实验组GATA4 mRNA相对表达量明显低于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05).结论 成功构建了GATA4基因的慢病毒载体,GATA4基因在体外可被有效抑制.