目视化常见角膜致病真菌基因芯片的构建

摘要

目的 制备目视化常见角膜致病真菌基因芯片.方法 将6属12种角膜致病真菌设计合成特异性寡核苷酸探针加尾后,固定于带正电荷尼龙膜的相应区域,用生物素标记的通用引物对12株标准菌株和82株临床分离株进行PCR扩增,将扩增产物与固定有寡核苷酸探针的尼龙膜进行反向斑点杂交,观测相应区域的斑点显色情况.结果 12种真菌均产生了530～630 bp的PCR扩增产物,得到了具有各自特征的杂交后生物素-亲和素斑点显色图谱,可直接从该图谱上判断不同菌种.对82株临床分离株的检测敏感率为84.1%,未出现非特异性交叉反应.结论 利用PCR结合反向斑点杂交技术制备目视化基因芯片,能够在3～4 h完成对我国临床上常见的12种角膜致病真菌的菌种鉴定,特异性及敏感性较高.