hMAM融合HSP70基因真核表达载体的构建及其免疫学活性测定

摘要

目的 构建融合人乳腺珠蛋白(hMAM)与人热休克蛋白70(HSP70)基因的真核表达载体pcDNA3.1-hMAM-HSP70,为乳腺癌的基因治疗奠定基础.方法 采用PCR法扩增hMAM基因,酶切测序分析后,与人HSP70基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1,构建重组载体pcDNA3.1-hMAM-HSP70,采用电穿孔法转染入COS-7细胞,间接免疫荧光法和ELISA法检测目的 基因的表达.结果 成功扩增HSP70与hMAM基因,酶切测序结果表明,重组载体含有hMAM与人HSP70的融合基因,COS-7细胞中可检测到hMAM表达;重组质粒免疫小鼠可诱导产生抗HSP70抗体.结论 hMAM与人HSP70融合基因的真核表达载体构建成功;此为进一步进行乳腺癌的基因治疗提供了实验依据.