红色毛癣菌、犬小孢子菌生物被膜模型构建及其对特比萘芬敏感性观察

摘要

目的 构建红色毛癣菌(T.rubrum)、犬小孢子菌(M.canis)体外生物被膜模型,并观察其对特比萘芬(TERB)的敏感性.方法 取红色毛癣菌、犬小孢子菌标准菌,分别接种到96孔板中,35℃静置分别孵育6、3h,制作红色毛癣菌、犬小孢子菌体外生物被膜模型,分别于培养24、48、72、96 h时倒置显微镜观察红色毛癣菌、犬小孢子菌生物被膜形态,采用XTT法观察红色毛癣菌、犬小孢子菌生物被膜生长情况,番红精法检测培养96 h时红色毛癣菌、72 h时犬小孢子菌成熟生物被膜中的细胞外基质(ECM,以OD492值表示),扫描电镜观察红色毛癣菌成熟生物被膜的形态.测定特比萘芬(TERB)对红色毛癣菌和犬小孢子菌的最低抑菌浓度(MIC)以及抑制50％和80％生物被膜的浓度(SMIC50、SMIC80).结果 培养48 h,两种菌株酵母相细胞与其延伸所形成的菌丝开始密集交织,培养72 h时两种菌株开始大量形成ECM并沿着菌丝形成团块聚集,可见多层膜状结构.红色毛癣菌和犬小孢子菌形成成熟生物被膜的时间分别为96、72 h.红色毛癣菌和犬小孢子菌成熟生物被膜OD492值分别为1.925±0.111、1.173 ±0.157.红色毛癣菌成熟生物被膜菌丝相互缠绕连接,形成精密的被膜网,菌丝外围清晰可见ECM.TERB对红色毛癣菌和犬小孢子菌浮游菌MIC分别是0.125、1μg/mL,而TERB对红色毛癣菌和犬小孢子菌成熟生物被膜的SMIC50、SMIC80均大于256 μg/mL.结论 成功构建体外红色毛癣菌和犬小孢子菌生物被膜模型.成熟的红色毛癣菌、犬小孢子菌生物被膜对TERB的敏感性低.