PCR-RFLP技术与结合SYBR Green Ⅰ荧光染料的实时荧光PCR技术对HBV拉米夫定耐药基因检测效果分析

摘要

目的 分析PCR-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)技术和结合SYBR GreenⅠ荧光染料的实时荧光PCR技术检测HBV拉米夫定耐药基因的效果.方法 采用PCR-RFLP技术和结合SYBR GreenⅠ荧光染料的实时荧光PCR技术检测186例份乙肝血清标本拉米夫定耐药HBV DNA聚合酶204、180位点基因突变情况,并进行DNA测序验证.结果 两种方法 在HBV DNA聚合酶204位点均检出YIDD、YVDD、YMDD/YIDD、YMDD/YVDD、YIDD/YVDD突变类型,未检测出YSDD突变类型,检测结果与DNA测序验证结果比较差异均无统计学意义(χ2=2.101、1.614,P均>0.05).两种方法 在HBV DNA聚合酶180位点均检出L180M、L180M+ M204I、L180M+ M204V突变类型,检测结果与DNA测序验证结果比较差异均无统计学意义(χ2=0.054、1.614,P均>0.05).结论 PCR-RFLP技术和结合SYBR GreenⅠ荧光染料的实时荧光PCR技术均可用于HBV拉米夫定耐药基因突变检测,但后者更适合大规模耐药基因突变筛查.