血细胞微粒制备方法的建立及评价

摘要

目的 建立血细胞微粒制备方法及流式细胞术检测方法.方法 利用冻融、研磨及超速离心方法制备不同来源的血细胞微粒.透射电镜下观察微粒的形态.采用流式细胞术检测血细胞微粒表面标志物及微粒浓度.利用对荧光标准品浓度测量结果所得的日内差和日间差评价流式细胞术检测方法的精密度.选用同日内制备的5批血细胞微粒,及不同实验人员于不同时间用本方法制备的血细胞微粒,根据微粒中磷脂酰丝氨酸和来源细胞表面标志物的表达情况,评价血细胞微粒制备方法的重复性与重现性.结果 制备的血细胞微粒均为直径0.1~1.0 μm的不规则圆形结构,符合微粒典型的形态学结构.流式细胞术检测结果显示,血细胞微粒中来源细胞表面标志物表达阳性率均在90%左右,部分表达磷脂酰丝氨酸.流式细胞术测得红细胞微粒、白细胞微粒、血小板微粒浓度分别为(2.2 ±0.29)×106个/μL、(1.4 ±0.21)×106个/μL、(1.8 ±0.31)×106个/μL.流式细胞术对荧光标准品浓度测量的平均日内差为4.7%,平均日间差为4.9%,精密度较好,且符合相应的要求.同日内制备的不同批次血细胞微粒表面标志物阳性表达率差异较小,不同实验室工作人员于不同时间制备的血细胞微粒表面标志物表达阳性率差异也较小,说明本血细胞微粒制备方法的重复性和重现性均较好.结论 以冻融、研磨及超速离心的方法成功制备了血细胞微粒,该方法重复性和重现性均较好.