亚砷酸钠对人肝星状细胞的激活作用及其与铁死亡的关系

摘要

目的 观察亚砷酸钠(NaAsO_(2))对人肝星状细胞的激活作用,并探讨其与铁死亡的关系。方法 体外培养人肝星状细胞LX-2,将细胞分为NaAsO_(2)组和对照组,NaAsO_(2)组分别加入5、10、15μmol/LNaAsO_(2)培养24 h,对照组正常培养。倒置显微镜下观察细胞形态变化;比色法检测谷胱甘肽(GSH)含量;荧光探针法检测细胞脂质活性氧(ROS);RT-PCR法检测铁死亡指标溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)以及纤维化指标α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ) mRNA;采用Spearman相关分析法分析纤维化指标与铁死亡指标的相关性。结果 NaAsO_(2)组中随着NaAsO_(2)浓度升高,细胞触角逐渐回缩,细胞数量减少,细胞间距变宽。与对照组比较,NaAsO_(2)不同浓度组细胞GSH含量均减少,其中15μmol/LNaAsO_(2)组GSH含量低于10、5μmol/LNaAsO_(2)组,10μmol/LNaAsO_(2)组低于5μmol/LNaAsO_(2)组(P均<0.05)。与对照组比较,NaAsO_(2)不同浓度组脂质ROS荧光强度增强。与对照组比较,5、10、15μmol/LNaAsO_(2)组α-SMA、CollagenⅠmRNA表达水平均升高,且15μmol/LNaAsO_(2)组高于5、10μmol/LNaAsO_(2)组,10μmol/LNaAsO_(2)组高于5μmol/LNaAsO_(2)组(P均<0.05);与对照组比较,5、10、15μmol/LNaAsO_(2)组SLC7A11、GPX4 mRNA表达水平均降低,且15μmol/LNaAsO_(2)组低于10、5μmol/LNaAsO_(2)组,10μmol/LNaAsO_(2)组低于5μmol/LNaAsO_(2)组。α-SMA mRNA与GPX4、SLC7A11 mRNA表达呈负相关(r分别为-0.72、-0.92,P均<0.01),CollagenⅠmRNA与GPX4、SLC7A11 mRNA表达亦呈负相关(r分别为-0.67、-0.90,P均<0.01)。结论 NaAsO_(2)能够改变肝星状细胞形状,促进细胞纤维化基因表达,引起肝星状细胞激活;在此过程中,SLC7A11、GPX4基因表达下调导致ROS堆积,促进肝星状细胞铁死亡;上述作用随着NaAsO_(2)浓度升高而增强。