核仁素对伯基特淋巴瘤细胞长春新碱敏感性的影响及其机制

摘要

目的探讨核仁素对伯基特淋巴瘤细胞长春新碱敏感性的影响及其机制。方法体外传代培养伯基特淋巴瘤CA46细胞。取传3代、对数生长期、生长状态良好的CA46细胞,随机分为Control组、核仁素-NC组、核仁素-KD组和核仁素-OE组,核仁素-NC组、核仁素-KD组、核仁素-OE组分别转染对照质粒、核仁素shRNA质粒、核仁素mRNA质粒,Control组不予转染。采用RT-qPCR法检测各组CA46细胞核仁素、Bcl-2 mRNA表达;采用MTT法检测细胞存活率,并计算长春新碱的半数抑制浓度(IC50);采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用蛋白免疫印迹实验检测Bcl-2蛋白表达;采用免疫共沉淀实验观察核仁素免疫沉淀复合物中Bcl-2 mRNA富集强度。结果Control组和核仁素-NC组CA46细胞核仁素mRNA相对表达量、长春新碱的IC50、长春新碱诱导后凋亡率以及Bcl-2 mRNA与蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。核仁素-KD组CA46细胞核仁素mRNA相对表达量、长春新碱的IC50、长春新碱诱导后凋亡率以及Bcl-2 mRNA与蛋白相对表达量均低于Control组和核仁素-NC组(P均<0.05),而核仁素-OE组上述指标均高于Control组和核仁素-NC组(P均<0.05)。在核仁素免疫沉淀复合物中可见Bcl-2 mRNA显著富集。结论核仁素可能通过上调Bcl-2表达,并直接与Bcl-2 mRNA结合而促进其稳定性,从而降低伯基特淋巴瘤细胞对长春新碱的敏感性。