circROBO1对视网膜母细胞瘤细胞增殖的影响及其机制

摘要

目的探讨circROBO1对视网膜母细胞瘤细胞增殖的影响及其机制。方法体外传代培养视网膜母细胞瘤细胞Y79。取传2代、对数生长期、生长状态良好的Y79细胞,随机分为si-circROBO1组、si-control组,分别转染si-circROBO1、si-control。转染6 h,继续培养24 h,收集细胞,采用RT-qPCR法检测circROBO1表达,采用CCK-8法检测细胞活力,采用细胞克隆形成实验检测细胞增殖能力。通过CircInteractome在线网站预测circROBO1与miR-217的结合位点,并采用双荧光素酶报告基因实验、RNA免疫沉淀实验验证两者的靶向调控关系。结果si-circROBO1组circROBO1相对表达量显著低于si-control组(P<0.05)。si-circROBO1组细胞活力、克隆形成率均显著低于si-control组(P均<0.05)。经CircInteractome在线网站预测,circROBO1序列中可能存在两个与miR-217结合的位点。经双荧光素酶报告基因实验、RNA免疫沉淀实验验证,共转染野生型circROBO1和miR-217可降低Y79细胞荧光素酶活性,并且miR-217主要富集在野生型circROBO1 MS2bs载体转染的Y79细胞中。结论circROBO1可能通过靶向调控miR-217促进视网膜母细胞瘤细胞增殖。