关于结核分枝杆菌定量方法的研究

摘要

目的:比较荧光定量PCR法和培养法在结核分枝杆菌定量上是否有差异及探讨应用DNA拷贝浓度替代菌液浓度的可能性.方法:将6种不同浓度的H37Rv标准菌株悬菌液各分为两组:PCR法组和培养法组,并在同一个721型可见光分光光度仪上测定其OD600值.然后,采用荧光定量PCR法,建立结核分枝杆菌DNA拷贝浓度 OD标准曲线,同时对同一标本进行培养并行菌落计数,比较PCR方法和培养法对结核分枝杆菌定量结果是否一致.结果:两种方法对结核分枝杆菌定量无显著性差异(P＞0.05).OD值与DNA拷贝浓度和悬菌液浓度均呈正相关,相关系数分别为1,P＜0.01.其回归方程PCR法为:C(H37Rv)= -0.0189+6.991OD,培养法为:C(H37Rv)= -0.0201+6.757OD,OD范围0.1～0.9.结论:荧光定量PCR法和培养法所得结果基本一致,是一种结核分枝杆菌定量新的方法,可替代菌液浓度法应用于动物实验.