猪细小病毒SY-99株非结构蛋白NS1基因的克隆与原核表达

摘要

根据猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)NADL-2株非结构蛋白基因NS1序列设计引物,扩增出了PPVSY-99株的NS1基因,将其克隆到原核表达载体pET28a中,得到重组质粒SYNS1/pET28a.将SYNS1/pET28a转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,使PPV NS1基因获得了表达,运用ELISA和Westem blotting证实了表达产物的特异性.经表达产物细胞定位分析,表达的NS1蛋白是以包涵体的形式存在于大肠杆菌中.通过改变诱导时间或诱导剂IPTG的浓度,确定了表达NS1蛋白的最佳诱导条件:IPTG终浓度为0.6 mmol·L-1,诱导时间为3 h,在大肠杆菌中最高表达含量为17.8%.亲和层析后,得到了纯化的NS1蛋白,在Western blottting检测中,纯化蛋白大大降低了反应背景.表达的NS1蛋白可作为免疫诊断试剂来检测PPV的发生,而且还可用于鉴别灭活疫苗免疫猪和自然感染猪.