建立以lipA和purH为靶基因的RTQ-PCR方法对水稻白叶枯病菌侵染过程进行定量分析

摘要

[目的]建立水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)的分子定量法,测定Xoo侵染水稻植株后不同时间的种群量及其变化.[方法]选用以lipA和purH为靶基因序列的引物P4和P5,用SYBR Green Ⅰ实时定量PCR(RTQ-PCR)分析在水稻接种植株内的病菌种群量.[结果]与细菌平板计数法相比,RTQ-PCR法定量结果基本相近或略高(≤10倍),变化趋势基本相似,用2对引物P4和P5进行RTQ-PCR定量无显著差异.接种3 d的植株内己有菌量积累,但不显症;从接种5 d开始,细菌明显增加,植株显症并逐渐加重;接种9～14 d菌量增加到峰值,并进入稳定平台期,植株显症严重.病菌种群量与植株显症间的关系可能与细菌群体感应机制有关.[结论]用RTQ-PCR分子定量法可以直接对水稻植株内的Xoo进行动态定量研究;提出了水稻病害分子定量"病菌靶基因拷贝数-DNA总量-种群量-植物病症"的研究模式.