小麦3种病毒病BSMV、BYDV-PAV、WYMV及WBD植原体病害的多重PCR同步检测

摘要

[目的]通过对检测小麦病毒病和植原体病害的多重PCR体系各成分和循环参数进行摸索和优化,建立了一种同时检测大麦条纹花叶病毒(barleystripemosaic virus,BSMV),大麦黄矮病毒PAV株系(barleyyellow dwarfvirus,BYDV-PAV)、小麦黄花叶病毒(wheatyellowmosaic virus,WYMV)和小麦蓝矮植原体(wheat blue dwarf,WBD)的多重PCR技术体系.[方法]运用根据3种病毒核苷酸保守区序列设计的特异性引物对、根据WBD植原体核糖体蛋白基因序列设计特异性引物对rpF1/R1,从影响多重PCR(M-PCR)扩增的引物浓度、Mg2+浓度、Taq DNA聚合酶浓度、dNTPs浓度、退火温度等方面进行多重PCR体系的优化.[结果]成功的在一个体系中对BSMV、BYDV-PAV、WYMV和WBD复合侵染的小麦材料进行多重PCR扩增,得到503、600、898、1 240 bp 4条特异性大小与试验设计相符的条带,建立了同时检测4种病原的多重PCR体系.[结论]该体系实现了植原体DNA病原和病毒RNA病原的同时检测,体现了多重PCR的优越性.