新疆南部图兰扇头蜱及卯携带R.raoultii的分子检测

摘要

[目的]世界上蜱类3科18属899种,中国有2科10属117种,新疆至少有2科10属45种,占全国蜱种类的1/3之多,分布也极其广泛.蜱直接危害和传播多种病原,且一些病原可经卵垂直传播,给畜牧业造成巨大经济损失,还严重威胁公共卫生安全.图兰扇头蜱是新疆南部荒漠及半荒漠地区常见种和优势种.确定新疆南部图兰扇头蜱及其卵是否携带立克次体,对该蜱及其传播立克次体病的防控意义重大.[方法]对新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室在新疆南部阿拉尔市某羊场收集的饱血雌性扇头蜱,置于一定湿度和一定温度的环境中产卵,随机取5个独立的卵样品及其对应的5只雌蜱为研究对象.通过对雌蜱及其卵分别处理后提取基因组DNA,进行PCR扩增蜱12S rRNA基因和立克次体16S rRNA基因,并对扩增产物测序,利用BLAST在线平台和多个分子生物学软件进行序列分析.[结果]5只雌蜱12S rRNA基因PCR扩增全部阳性,测序获得的4段蜱12SrRNA基因序列完全一致;Blast分析与GenBank数据库中图兰扇头蜱12S rRNA基因序列相似性高达99％以上,且高相似性前五基因序列均为图兰扇头蜱,其中包括来自新疆绵羊的图兰扇头蜱;本研究蜱12S rRNA基因序列提交GenBank数据库获得登录号为MG744514,与来自于GenBank数据库图兰扇头蜱、血红扇头蜱、微小牛蜱、边缘革蜱、草原革蜱、长角血蜱、小亚璃眼蜱、亚洲璃眼蜱、残缘璃眼蜱、全沟硬蜱及外围群尘螨的22个12S rRNA基因序列的进化树显示,研究所获得的蜱12S rRNA基因序列与图兰扇头蜱进化关系最近,聚在同一个小分支;确定了该扇头蜱为图兰扇头蜱.5只产卵后的雌蜱和相应蜱所产的全部卵立克次体16S rRNA基因PCR扩增,有1只蜱和其产的卵样品阳性,蜱携带率为20％;雌蜱及其卵立克次体16S rRNA基因测序结果完全一致;Blast分析与GenBank数据库中Rickettsia raoultii 16S rRNA基因序列相似性高达99％以上,且高相似性前五基因序列为4个Rickettsia raoultii和1个Rickettsia sp.,其中包括来自新疆2011年的亚洲璃眼蜱和草原革蜱的立克次体;立克次体16S rRNA基因序列提交GenBank数据库获得登录号为MG744513,与来自于GenBank数据库的37个24种立克次体16S rRNA基因序列的进化树显示,研究获得的立克次体16S rRNA基因序列与Rickettsia raoultii进化关系最近,聚在同一个小分支,与其他15种立克次体同属于斑点热群立克次体;确定了本研究图兰扇头蜱及其卵均携带斑点热群立克次体R.raoultii.[结论]首次发现图兰扇头蜱及其卵携带R.raoultii.