具有新霉素抗性的小鼠胚胎成纤维细胞的分离及饲养层制备

摘要

目的:建立一种操作简便,并能高效获得高质量的具有新霉素抗性(neo)的C57BL/6J小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast cells,MEF细胞)的分离培养方法;所得细胞经过丝裂霉素C处理后能作为饲养层细胞支持小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESC)的生长和neo抗性筛选。方法:取12.5-14.5d的胎鼠躯干部剪碎成糊状,利用Collagenase type IV和Trypsin的消化作用获得原代MEF细胞。使用丝裂霉素C处理MEF细胞获得饲养层细胞。结果:制备得到的MEF细胞形态饱满、增殖速度快、细胞数量充足。使用丝裂霉素C处理细胞后,细胞正常存活但失去增殖能力,能支持mESC的生长和neo抗性筛选。结论:成功制备具有neo抗性的MEF细胞和饲养层细胞。