异甘露聚糖酶基因的克隆表达及酶学性质分析

摘要

以pET-30（a）为表达载体,将来源于枯草芽孢杆菌K-6（Bacillus subtilis K-6）的异甘露聚糖酶基因（isoman K-6）在Escherichia coli BL21（DE3）中进行了表达。Isoman K-6登录号为HQ902141,基因全长为1083bp,共编码360个氨基酸,工程菌酶活为415.9U/mL,SDS-PAGE电泳表明,工程酶ISOMAN K-6分子量约为45000u,与预期分子量相符。经IDAHisBind树脂柱纯化的纯酶酶学性质研究表明,该重组酶为金属酶,Al3+和Ba2+对其有很强的激活作用,其最适反应温度为55℃、最适pH为6.0,且在pH4.5~7之间有着较好的稳定性,以槐豆胶为底物时,Vmax和Km分别为1.3U/mL和7.3mg/mL。